番茄及其制品中六氢番茄红素和八氢番茄红素的测定高效液相色谱法

 

 

 

T/SSFS 0010-2024

 

1 范围

 

    本文件规定了番茄及其制品（番茄汁、番茄酱、番茄干粉和番茄籽油）中六氢番茄红素和八氢番茄红素的高效液相色谱测定方法。

 

    本文件适用于番茄及其制品（番茄汁、番茄酱、番茄干粉和番茄籽油）中六氢番茄红素和八氢番茄红素的测定。

 

 

2 规范性引用文件

 

    下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

    GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

 

 

3 术语和定义

 

本文件没有需要界定的术语和定义。

 

 

4 原理

 

    试样中的六氢番茄红素和八氢番茄红素经提取剂提取、浓缩，用高效液相反相色谱法分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。

 

 

5 试剂和材料

 

    除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

 

5.1  甲醇(CH3OH)：色谱纯。

 

5.2  甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3，MTBE]：色谱纯。

 

5.3  正己烷(C6H14)。

 

5.4  丙酮（CH3COCH3）。

 

5.5  乙酸乙酯（C4H8O2，EA）。

 

5.6  提取液：正己烷：甲醇：丙酮（2：1：1，v/v/v）按体积比混匀备用。

 

5.7  稀释液：甲醇：甲基叔丁基醚（1：1，v/v）按体积比混匀备用。

 

5.8  六氢番茄红素（C40H62）：纯度≥97%。

 

5.9  八氢番茄红素（C40H64）：纯度≥97%。

 

5.10  六氢番茄红素标准储备液（1 mg/mL）：准确称取1 mg六氢番茄红素（5.8）于1 mL棕色容量瓶，用少量乙酸乙酯溶解并定容至刻度，-20 °C避光密封保存。有效期不超过7天。储备液临用前应回温至室温，并按附录B的规定校正。

 

5.11  八氢番茄红素标准储备液（1 mg/mL）：准确称取1 mg八氢番茄红素（5.9）于1 mL棕色容量瓶，用少量乙酸乙酯溶解并定容至刻度，-20 °C避光密封保存。有效期不超过7天。储备液临用前应回温至室温，并按附录B的规定校正。5.12六氢番茄红素标准中间液（0.5 mg/mL）：准确移取0.5 mL六氢番茄红素标准储备液（5.10）于1 mL容量瓶中，用稀释液（5.7）定容至刻度，得到质量浓度为0.5 mg/mL的标准中间液。现用现配。

 

5.13  八氢番茄红素标准中间液（0.5 mg/mL）：准确移取0.5 mL八氢番茄红素标准储备液（5.11）于1 mL容量瓶中，用稀释液（5.7）定容至刻度，得到质量浓度为0.5 mg/mL的标准中间液。现用现配。

 

5.14  六氢番茄红素标准工作溶液：准确移取一定体积的六氢番茄红素标准中间液（5.12）于5 mL容量瓶中，用稀释液（5.7）定容至刻度，得到质量浓度为2.5 μg/mL、5 μg/mL、7.5 μg/mL、10 μg/mL、12.5 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL的系列标准工作液。现用现配。

 

5.15  八氢番茄红素标准工作溶液：准确移取一定体积的八氢番茄红素标准中间液（5.13）于5 mL容量瓶中，用稀释液（5.7）定容至刻度，得到质量浓度为2.5 μg/mL、5 μg/mL、7.5 μg/mL、10 μg/mL、12.5 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL的系列标准工作液。现用现配。

 

 

6 仪器设备

 

6.1  高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

 

6.2  天平：感量为0.1 mg 和0.01 g。

 

6.3  匀浆机。

 

6.4  筛网（14目）。

 

6.5  磁力搅拌器。

 

6.6  真空泵。

 

6.7  旋转蒸发仪。

 

6.8  聚四氟乙烯微孔滤膜：0.22 μm。

 

 

7 样品制备

 

    新鲜番茄：取一定数量的有代表性的样品，去蒂切块，用匀浆机（6.3）破碎30 s，过14目筛网（6.4）去除绝大多数皮和籽，得到番茄浆，转移至锥形瓶，备用。

 

    番茄汁：依据产品中番茄的添加量，取相当于含新鲜番茄15 g～20 g的样品至锥形瓶，备用。

 

    番茄酱：充分搅匀样品，取0.5 g番茄酱至锥形瓶，备用。

 

    番茄干粉：充分混匀样品，取0.5 g番茄干粉至锥形瓶，备用。

 

    番茄籽油：转动并翻转装满样品的容器，搅匀，取0.5 g番茄籽油至锥形瓶，备用。

 

 

附 录A

（资料性）

六氢番茄红素和八氢番茄红素的色谱图

 

A.1 六氢番茄红素色谱图

 

六氢番茄红素色谱图，见图A.1与图A.2。

 

注：此图显示标准品中六氢番茄红素主要含5种同分异构体，分别为顺式六氢番茄红素1（P1，保留时间：9.752 min）、顺式六氢番茄红素2（P2，保留时间：9.993 min）、全反式六氢番茄红素（P3，保留时间：11.529 min）、顺式六氢番茄红素3（P4，保留时间：12.030 min）和顺式六氢番茄红素4（峰P5，保留时间：12.869 min）。以5个峰的峰面积之和作为六氢番茄红素的峰面积

 

图A.1 六氢番茄红素标准品色谱图（40μg/mL）

 

注：此图显示样品含六氢番茄红素2种，分别为六氢番茄红素1（峰1，保留时间,9.363 min）、六氢番茄红素2（峰）。

 

 

图A.2 六氢番茄红素样品色谱图（新鲜番茄）

A.2 八氢番茄红素色谱图

 

八氢番茄红素色谱图，见图A.3与图A.4。

 

注：此图显示标准品中八氢番茄红素主要含2种同分异构体，分别为15顺八氢番茄红素（p1，保留时间：8.620 min）和全反式八氢番茄红素（p2，保留时间：9.086 min）。以2个峰的峰面积之和作为八氢番茄红素的峰面积。

 

图A.3 八氢番茄红素标准品色谱图（40μg/mL）

 

注：此图显示样品中含八氢番茄红素1种（保留时间：8.311min）。

 

图A.4 八氢番茄红素样品色谱图（新鲜番茄）

 

 

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