食品添加剂茶黄素的检测-国家食品标准

 

 

 

检验方法

 

A.1  安全提示

 

    本标准的检验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性,操作时应采取适当的安全和防护措施。使用易燃品时,严禁使用明火加热。

 

 

A.2  一般规定

 

    本标准除另有规定外,所用试剂均为分析纯,所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品应按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备,试验用水应符合GB/T6682的规定。试验中所用溶液在未注明用何种溶液配制时,均指水溶液。

 

 

A.3  鉴别试验

 

    鉴别试验可与茶黄素含量测定同时进行,试样溶液色谱图中的主峰保留时间应与标准溶液色谱图中的主峰保留时间基本一致。

 

 

A.4  茶黄素含量的测定

 

A.4.1  方法提要

 

    试样中的茶黄素经含乙腈的稳定溶液提取后,经液相色谱C18柱分离,紫外或二极管阵列检测器检测,外标法定量。

 

A.4.2  试剂与材料

 

A.4.2.1  乙腈:色谱纯。

 

A.4.2.2  磷酸。

 

A.4.2.3  乙二胺四乙酸二钠。

 

A.4.2.4  L-抗坏血酸。

 

A.4.2.5  磷酸溶液(0.1%):移取1mL磷酸至烧杯中,用适量水溶解后转移至1000mL容量瓶并定容至刻度。

 

A.4.2.6  乙二胺四乙酸二钠溶液(10mg/mL):称取1.00g(精确至0.01g)乙二胺四乙酸二钠,用适量水溶解后转移至100mL容量瓶并定容至刻度,临用现配。

 

A.4.2.7  L-抗坏血酸溶液(10mg/mL):避光条件下称取1.00g(精确至0.01g)L-抗坏血酸,用适量水溶解后转移至100mL棕色容量瓶并定容至刻度,临用现配。

 

A.4.2.8  稳定溶液:分别移取50mL乙二胺四乙酸二钠溶液(A.4.2.6)、50mLL-抗坏血酸溶液(A.4.2.7)和175mL乙腈(A.4.2.1)至1000mL棕色容量瓶中,用水定容至刻度,临用现配。

 

A.4.3  标准品

 

A.4.3.1  茶黄素(TF)标准品(CAS号:4670-05-7):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

 

A.4.3.2  茶黄素-3-没食子酸酯(TF-3-G)标准品(CAS号:30462-34-1):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

A.4.3.3  茶黄素-3’-没食子酸酯(TF-3’-G)标准品(CAS号:28543-07-9):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

 

A.4.3.4  茶黄素-3,3’-双没食子酸酯(TFDG)标准品(CAS号:30462-35-2):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

 

A.4.4  准溶液配制

 

A.4.4.1  茶黄素标准储备溶液(2.00mg/mL):分别准确称取茶黄素(TF)、茶黄素-3-没食子酸酯(TF-3-G)、茶黄素-3’-没食子酸酯(TF-3’-G)、茶黄素-3,3’-双没食子酸酯(TFDG)各20mg(精确至0.0001g),分别置于10mL棕色容量瓶中,各加入适量稳定溶液(A.4.2.8)溶解并定容至刻度,混匀。于4°C冰箱中保存,保存期6个月。

 

A.4.4.2  茶黄素混合标准系列工作溶液:分别准确移取适量TF、TF-3-G、TF-3’-G、TFDG标准系列储备溶液于10mL容量瓶中,用稳定溶液(A.4.2.8)定容至刻度,配成20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL的混合标准工作溶液,临用现配。

 

A.4.5  仪器和设备

 

A.4.5.1  高效液相色谱仪:带有紫外检测器或二极管阵列检测器。

 

A.4.5.2  分析天平:感量为0.01g、0.0001g。

 

A.4.5.3  0.45μm聚四氟乙烯滤膜。

 

A.4.6  分析步骤

 

A.4.6.1  试样溶液的制备准确称取试样0.1g(精确至0.0001g),置于100mL棕色容量瓶中,用适量稳定溶液(A.4.2.8)溶解并定容至刻度。混匀后,经0.45μm聚四氟乙烯滤膜过滤至棕色进样瓶中备用。

 

A.4.6.2  液相色谱参考条件参考条件如下:

 

    a)色谱柱:C18反相色谱柱(150mm×4.6mm,3.5μm)或性能相当者。

 

    b)流动相:A相为乙腈(A.4.2.1),B相为磷酸溶液(A.4.2.5),梯度洗脱程序见表A.1。

 

    c)流速:1mL/min;

 

    d)柱温:35°C;

 

    e)进样量:10μL;

 

    f)波长:278nm。

 

表A.1流动相梯度洗脱程序

 

时间/min	A/%	B/%
0.0	17.5	82.5
0.5	17.5	82.5
15.0	25	75
24.0	25	75
24.5	50	50
29.5	50	50
30.0	17.5	82.5
35.0	17.5	82.5

 

 

A.4.6.3  测定

 

    在参考色谱条件下,分别将系列标准溶液、试样溶液注入液相色谱仪中进行测定。以混合标准系列溶液的质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,由色谱软件工作站拟合标准曲线。试样溶液测得峰面积,根据标准曲线得到待测液中各种茶黄素的质量浓度。

各组分的参考保留时间和色谱图见图B.1。

 

A.4.7  结果计算

 

    试样中茶黄素各组分的质量分数(wi)按式(A.1)计算:

 

 

    式中:

    c_i———待测液中茶黄素各组分的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

    V———试样溶液的体积,单位为毫升(mL);

    m———试样的质量,单位为克(g);

    1000———换算系数。

 

    试验结果以平行测定结果的算术平均值为准,保留3位有效数字。在重复性条件下获得茶黄素的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的5%。

 

    试样中茶黄素的质量分数(w)按式(A.2)计算:

 

ω=ω_TF+ω_TF-3-G+ω_TF-3’-G+ω_TFDG..............................(A.2)

 

    式中:

 

    ω_TF———试样中TF的质量分数;

    ω_TF-3-G的质量分数;

    ω_TF-3’-G———试样中TF-3’-G的质量分数;

    ω_TFDG———试样中TFDG的质量分数。

 

 

A.5  咖啡碱含量的测定

 

A.5.1  方法提要试样中的咖啡碱经甲醇-水溶液提取后,经液相色谱仪C18柱分离,紫外或二极管阵列检测器检测,外标法定量。

 

A.5.2  试剂与材料

 

A.5.2.1  甲醇:色谱纯。

 

A.5.2.2  乙腈:色谱纯。

 

A.5.2.3  磷酸。

 

A.5.2.4  甲醇-水溶液(6+4):量取600mL甲醇加入400mL水,混匀。

A.5.3  标准品咖啡碱标准品(C8H10N4O2,CAS号:58-08-2):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

 

A.5.4  标准溶液配制

 

A.5.4.1  咖啡碱标准储备溶液(1.00mg/mL):准确称取咖啡碱标准品10mg(精确至0.0001g),置于10mL棕色容量瓶中,加入适量甲醇-水溶液溶解并定容至刻度,混匀后作为标准储备液备用。该溶液于4°C冰箱中保存,保存期6个月。

 

A.5.4.2  咖啡碱标准系列工作溶液:分别准确移取咖啡碱标准储备液50.0μL、100μL、250μL、1.00mL、2.50mL、12.50mL于50mL容量瓶中,用甲醇-水溶液定容至刻度,配成1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、250μg/mL的标准系列工作溶液,临用现配。

 

A.5.5  仪器和设备

 

A.5.5.1  高效液相色谱仪:带有紫外检测器或二极管阵列检测器。

 

A.5.5.2  分析天平:感量为0.0001g。

 

A.5.6  分析步骤

 

A.5.6.1  试样溶液的制备准确称取试样0.05g(精确至0.0001g),置于100mL容量瓶中,用适量甲醇-水溶液溶解并定容,混匀,经0.45μm滤膜过滤后备用。

 

A.5.6.2  液相色谱参考条件参考条件如下:a)色谱柱:C18反相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)或性能相当者;b)流动相:A相为甲醇,B相为水,梯度洗脱程序见表A.2;c)流速:1mL/min;d)柱温:35°C;e)进样量:5μL;f)波长:273nm。

 

 

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