水产品中鱼类、虾类、蟹类、鳖类等水产品中37种农药的测定气相色谱—串联质谱法

 

1  范围

 

    本文件规定了水产品中37种农药残留量的气相色谱—串联质谱测定方法。

 

    本文件适用于鱼类、虾类、蟹类、鳖类等水产品中37种农药的测定。

 

 

 

 

2  规范性引用文件

 

    下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

    GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

 

 

3  术语和定义

 

本文件没有需要界定的术语和定义。

 

 

4原理

 

    试样用乙腈作为提取液，经氯化钠盐析，分散固相萃取净化，用气相色谱—串联质谱仪测定，用环氧七氯内标法定量。

 

 

5试剂和材料

 

    除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

 

5.1  乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）

 

    色谱纯。

 

5.2  丙酮（CH3COCH3，CAS号：110-54-3）

 

    色谱纯。

 

5.3  正己烷（C6H14，CAS号：110-54-3）

 

    色谱纯。

 

5.4  中性氧化铝（Al2O3）

 

    200目～300目。

 

5.5  无水硫酸镁（MgSO4）

 

    650°C灼烧4h，置于干燥器内冷却后备用。

 

5.6  氯化钠（NaCl）

 

    500°C灼烧4h，置于干燥器内冷却后备用。

 

5.7  N-丙基乙二胺（PSA吸附剂）

 

    粒径范围40μm～60μm，平均孔径100Å。

 

5.8  十八烷基键合硅胶（C18吸附剂）

 

    粒径范围40μm～60μm，平均孔径60Å。

 

5.9  微孔滤膜

 

    0.22μm，有机膜。

 

5.10  丙酮-正己烷溶液（10:90）

 

    量取10mL丙酮加入90mL正己烷中，混匀。

 

5.11  标准品

 

    37种农药及环氧七氯的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子量见附录A，纯度应≥95%。

 

5.12  标准溶液配制

 

5.12.1  标准储备溶液：分别准确称取标准品（5.11）10mg，用丙酮溶解并定容至10mL，此溶液浓度均为1000mg/L。2°C~8°C避光密封保存，有效期6个月。

 

5.12.2  混合标准中间溶液：移取1.00mL标准储备溶液（5.12.1）用丙酮定容至100mL，配制成10mg/L的混合标准中间溶液，2°C~8°C避光密封保存，有效期1个月。

 

5.12.3  内标溶液：准确称取10mg环氧七氯，用丙酮溶解并定容至100mL，溶液浓度均为100mg/L。

 

 

6  仪器和设备

 

6.1  气相色谱—串联质谱仪：配有电子轰击源。

 

6.2  分析天平：感量0.01mg和0.01g。

 

6.3  低温离心机：转速≥8000r/min。

 

6.4  涡旋振荡器：转速≥2000r/min。

 

6.5  超声波清洗器：超声频率40kHz，超声功率200W。

 

 

7  分析步骤

 

7.1  试样制备与保存

 

    鱼类去头、骨、内脏，取肌肉、鱼皮等可食用部分绞碎混合均匀后备用，制好后将试样于-18°C以下冷冻保存；

 

    虾类去虾头、虾皮、肠腺，得到整条虾肉部分绞碎混合均匀后备用，制好后将试样于-18°C以下冷冻保存；

 

    蟹类取可食部分，绞碎混合均匀后备用，制好后将试样于-18°C以下冷冻保存；

 

 

 

    龟鳖类取可食部分，绞碎混合均匀后备用，制好后将试样于-18°C以下冷冻保存；

 

7.2  提取

 

    称取5g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入10mL水，涡旋混匀1min后，准确加入10.0mL乙腈（5.1），涡旋振荡1min，超声提取20min，4°C条件下8000r/min离心5min，取上清液于装有5g氯化钠（5.6）的50mL离心管中，再加10.0mL乙腈（5.1），混匀1min，4°C条件下8000r/min离心5min，合并上清液。

 

7.3  净化和浓缩

 

    将6.00mL提取液置于装有100mgPSA（5.7）、100mgC18（5.8），500mg中性氧化铝（5.4）和300mg无水硫酸镁（5.5）的15mL离心管中，涡旋混匀3min，4°C下8000r/min离心3min。取4.00mL上清液氮吹近干，准确加入0.500mL丙酮—正己烷溶液（5.10），加入内标溶液（5.12.3）15μL，涡旋混匀10s，过0.22μm微孔滤膜（5.9），供气相色谱—串联质谱联用仪分析。

 

7.4  测定

 

7.4.1  色谱参考条件

 

7.4.1.1  色谱柱：（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm），或性能相当者。

 

7.4.1.2  进样量：1.0μL。

 

7.4.1.3  进样口温度：250°C。

 

7.4.1.4  进样方式：不分流进样。

 

7.4.1.5  载气：高纯氮气，纯度≥99.999%。

 

7.4.1.6  柱流速：1.41mL/min。

 

7.4.1.7  柱温程序：80°C，保持1min，40°C/min升至170°C，保持1min，20°C/min升至290°C，保持7min。

 

7.4.2  质谱参考条件

 

7.4.2.1  离子源：电子轰击源（EI），70eV。

 

7.4.2.2  接口温度：280°C。

 

7.4.2.3  离子源温度：230°C。

 

7.4.2.4  溶剂延迟时间：3.2min。

 

7.4.2.5  检测方式：多反应监测（MRM），每种农药分别选择一对定量离子、一对定性离子。每组所有需要检测离子对按照出峰顺序，分时段分别检测。每种农药的保留时间、定量离子对、定性离子对和碰撞电压，参见附录B。

 

7.5  标准工作曲线

 

  精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用丙酮—正己烷溶液（5.10）稀释成质量浓度为0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L和0.8mg/L的标准工作溶液。空白基质溶液氮气吹干，加入15μL内标溶液，分别加入1mL上述标准工作溶液复溶，过微孔滤膜（5.9）配置成系列基质混合标准工作溶液，供气相色谱—质谱联用仪测定。以农药定量离子峰面积和内标物定量例子峰面积的比值为纵坐标、农药标准溶液质量浓度和内标物质量浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线。

 

7.6  定性测定

 

  在相同试验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；且试样中定性、定量离子的相对丰度比与浓度接近的标准溶液中对应的定性、定量离子的相对丰度比进行比较，若偏差不超过表1规定的范围，可判定为试样中含有对应的待测物质。

 

表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

 

相对丰度（%）	＞50	＞20-50	＞10-20	≤10
允许偏差（%）	±20	±25	±30	±50

 

 

7.7  试样溶液的测定

 

    将基质混合标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱—质谱联用仪中，保留时间和定性离子定性，测得定量离子峰面积，待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。

 

7.8  平行试验

 

    按7.2~7.3的规定对同一试样进行平行试验测定。

 

7.9  空白试验

 

    除不加试样外，均按7.2~7.3的规定进行平行操作。

 

 

8  结果计算和表述

 

8.1  定量测定

 

    采用标准曲线法或单点内标法定量。按式（1）或仪器数据处理软件计算获得：

 

 

    式中：

 

    X——试样中被测物质的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

 

    C——可从标准曲线上或仪器上直接得到被测物质的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

 

    f——稀释因子；

 

    V——溶解残余物所用定容溶液体积，单位为毫升（mL）；

 

    m——试样质量，单位为克（g）；

 

    F——最终分取体积/提取液体积。计算结果应扣除空白值，保留3位有效数字。

 

 

9  定量限

 

    本方法的定量限为0.01mg/kg~0.03mg/kg（参见附录A）。

 

 

10  准确度

 

    本方法在0.03mg/kg~0.3mg/kg添加浓度水平上的回收率在70%~120%之间，见附录D。

 

 

11  精密度

 

    在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%，见附录D。

 

 

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