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枸杞中94种农药及代谢物残留量的测定液相色谱-质谱联用法
94种农药及代谢物中文名称:
3-羟基克百威、N-甲酰基-乙基多杀菌素-J、N-脱甲基-乙基多杀菌素-J、阿维菌素、苯醚甲环唑、吡虫啉、吡蚜酮、吡唑醚菌酯、丙环唑、丙溴磷、虫酰肼、除虫菊素Ⅰ、除虫脲、哒螨灵、单甲脒、敌百虫、丁氟螨酯、啶虫脒、毒死蜱、对硫磷、多菌灵、多杀霉素A、多杀霉素D、二甲戊乐灵、二嗪磷、呋虫胺、伏杀硫磷、氟吡呋喃酮、氟虫腈、氟虫腈砜、氟啶虫胺腈、氟啶虫酰胺、氟啶脲、氟硅唑、己唑醇、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、甲胺磷、甲基硫菌灵、甲基异柳磷、甲萘威、甲氰菊酯、甲霜灵、抗蚜威、克百威、乐果、藜芦碱、螺虫乙酯、螺虫乙酯-单-羟基、螺虫乙酯-酮基-羟基、螺虫乙酯-烯醇、螺虫乙酯-烯醇-葡萄糖苷、螺螨酯、氯吡脲、氯虫苯甲酰胺、氯菊酯、马拉硫磷、咪鲜胺、咪鲜胺-脱氨基咪唑、咪鲜胺-脱咪唑甲酰胺基、醚菌酯、嘧菌酯、嘧霉胺、灭多威、灭幼脲、炔螨特、噻虫胺、噻虫嗪、噻螨酮、三唑醇、三唑磷、三唑酮、十三吗啉、双丙环虫酯、四螨嗪、涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜、肟菌酯、戊唑醇、烯啶虫胺、烯酰吗啉、烯唑醇、辛硫磷、溴氰虫酰胺、溴氰虫酰胺代谢物J9Z38、溴氰菊酯、氧乐果、乙基多杀菌素J、乙基多杀菌素L、乙螨唑、乙酰甲胺磷、乙唑螨腈、鱼藤酮、唑螨酯
1 范围
本文件规定了枸杞中94种农药及代谢物残留量的液相色谱-质谱联用测定方法。
本文件适用于枸杞中94种农药及代谢物残留量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理试样
用乙腈提取，提取液经PSA、C18和GCB分散固相萃取净化，采用液相色谱-质谱联用仪检测，保留时间和离子对定性，外标法定量。
5 试剂与材料
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。
5.1.2 氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。
5.1.3 无水硫酸镁（MgSO4，CAS号：7487-88-9）。
5.1.4 柠檬酸钠二水合物（C6H5Na3O7·2H2O，CAS号：6132-04-3）。
5.1.5 柠檬酸氢二钠倍半水合物（C6H6Na2O7·1.5H2O，CAS号：6132-05-4）。
5.2 标准品
94种农药标准品，参见附录A，纯度均≥95%。
5.3 标准溶液配制
5.3.1 标准储备溶液：分别称取适量（精确至0.1mg）各农药标准品，用丙酮溶解，配制成1000mg/L标准储备液，避光-18°C保存，有效期1年。
5.3.2 混合标准溶液：吸取一定量的单个农药标准储备溶液于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度。混合标准溶液浓度为10mg/L，避光-18°C保存，有效期1个月。
5.3.3 基质混合标准工作溶液：根据需要分取适量混合标准溶液，氮气吹干，加入一定量的空白基质溶液，混匀。基质混合标准工作溶液现用现配。
5.4 材料
5.4.1 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：粒径40μm～63μm。
5.4.2 十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：粒径40μm～63μm。
5.4.3 石墨化炭黑（GCB）：粒径40μm～120μm。
5.4.4 微孔滤膜：有机相，0.22μm。
6 仪器与设备
6.1 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。
6.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。
6.3 高速匀浆机：转速不低于12000r/min。
6.4 离心机：转速不低于4000r/min。
6.5 氮吹仪：可控温。
6.6 组织捣碎机。
6.7 高速粉碎机。
6.8 涡旋混合器。
7 试样制备
7.1 枸杞鲜果用组织捣碎机匀浆，放入样品瓶或袋中。
7.2 枸杞干果，于-18°C冷冻2h后立即用高速粉碎机粉碎，或直接加液氮粉碎，放入样品瓶或袋中。
7.3 制备试样于-18°C冷冻保存，备用。
8 分析步骤
8.1 试样提取及净化
8.1.1 枸杞鲜果
称取匀浆试样10g（精确至0.01g）于50mL离心管，加入20.0mL乙腈，用高速匀浆机于12000r/min匀浆2min，加入4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠二水合物、0.5g柠檬酸氢二钠倍半水合物，剧烈振摇1min，4000r/min离心5min。吸取1.00mL上清液至盛有净化材料的15mL离心管中（每毫升提取液用150mg无水硫酸镁、25mgPSA、10mgC18和3mgGCB），涡旋1min，4000r/min离心5min，再将上清液过微孔滤膜上机测定。
8.1.2 枸杞干果
称取粉碎试样5g（精确至0.01g）于50mL离心管，加入10.0mL水浸泡30min，加入20.0mL乙腈，用高速匀浆机于12000r/min匀浆2min，加入4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠二水合物、0.5g柠檬酸氢二钠倍半水合物，剧烈振摇1min，4000r/min离心5min。吸取1.00mL上清液至盛有净化材料的15mL离心管中（每毫升提取液用150mg无水硫酸镁、25mgPSA、10mgC18和3mgGCB），涡旋1min，4000r/min离心5min，再将上清液过微孔滤膜上机测定。
8.2 测定
8.2.1 液相色谱参考条件
a）色谱柱：C18柱，100mm×2.1mm（i.d），3.5μm，或性能相当者。
b）柱温：40°C。
c）流速：0.4mL/min。
d）流动相梯度：见表1。
表1流动相洗脱条件
| 时间/min | 0.1%甲酸水/% | 甲醇/% |
| 0 | 70 | 30 |
| 0.5 | 70 | 30 |
| 0.6 | 10 | 90 |
| 7.75 | 95 | 5 |
| 10.2 | 95 | 5 |
| 11.5 | 10 | 90 |
| 15.0 | 10 | 90 |
| 15.1 | 70 | 30 |
| 19.0 | 70 | 30 |
e）进样量：1.0μL。
8.2.2 质谱参考条件
a）电离方式：ESI；
b）喷雾电压：-2.5kV、+3.5kV；
c）离子传输管温度：325°C；
d）雾化温度：350°C；
e）鞘气：35arb；
f）辅气：10arb。
g）选择反应监测（SRM）：每种农药分别选择2个子离子，保留时间、母离子、子离子及离子对质谱参数，参见附录B。
8.2.3 定性测定
在8.2 条件下，被测试样中检出色谱峰的保留时间与相应标准品色谱峰的保留时间相一致，扣除背景的样品质谱图中，定性和定量离子均出现，相对丰度比与质量浓度相当的标准工作溶液相对丰度一致，且相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在目标农药。本方法的标准物质选择反应监测LC-MS/MS图参见附录D。
表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差
| 相对离子丰度 | >50% | 20%至50% | 10%至20% | ≤10% |
| 允许相对偏差 | ±20% | ±25% | ±30% | ±50% |
8.2.4 定量测定
本方法采用外标法定量，定量用标准溶液采用空白基质混合标准工作溶液，标准溶液浓度应与待测目标农药的浓度相近。
8.3 平行试验
按上述步骤对同一试样进行平行试验测定。
8.4 空白试验
除不加试样外，其他按上述步骤进行操作。
9 结果计算
试样中各农药的含量按式（1）计算，结果需扣除空白值。
..............................（1）
式中：
X——试样中被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A——试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积；
V——提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；
CS——基质标准工作溶液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；
AS——标准工作溶液中被测物的质量色谱图峰面积；
m——试样质量的数值，单位为克（g）。
注：计算结果用平行测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字，含量超过1mg/kg时保留3位有效数字。
10 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录E的要求。
11 定量限和回收率
11.1 定量限
本方法的定量限为0.01mg/kg～0.05mg/kg（见附录C）。
11.2 回收率
本方法的添加水平和回收率参见附录F。
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