医疗废水15种氟喹诺酮类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法

 

 

 

警告：本方法所使用的试剂和标准溶液具有一定的毒性，试剂配制和样品前处理过程应在通风橱中进行；操作时应按要求佩戴防护器具，避免吸入呼吸道或接触皮肤和衣物。

 

1  适用范围

 

    本标准规定了测定医疗废水中15种氟喹诺酮类抗生素的液相色谱-串联质谱法。

 

    本标准适用于医疗废水中氟罗沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、丹诺沙星、马波沙星、洛美沙星、奥比沙星、二氟沙星、沙拉沙星、莫西沙星、司帕沙星等共15种氟喹诺酮类抗生素的测定。

 

    当取样量为1000ml，定容体积为1ml，进样体积为5μl时，15种氟喹诺酮类抗生素的方法检出限为1ng/L～2ng/L，测定下限为4ng/L～8ng/L；详见附录A。

 

 

2  规范性引用文件

 

    下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

    GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

 

    HJ91.1污水监测技术规范

 

    HJ494水质采样技术指导

 

 

3  方法原理

 

    医疗废水样品经过滤后经固相萃取柱富集和净化后进样，用液相色谱-串联质谱分离检测氟喹诺酮类化合物，根据保留时间和特征离子定性，内标法定量。

 

 

 

4  试剂和材料

 

    除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的不含目标化合物的纯水。

 

4.1  甲醇（CH3OH）：色谱纯。

 

4.2  甲酸（HCOOH）：色谱纯。

 

4.3  盐酸：ρ（HCl）=1.19g/ml。

 

4.4  甲酸铵（HCOONH4）：色谱纯。

4.5  盐酸溶液：pH≤2。用适量盐酸（4.3）将水调节至pH≤2。

 

4.6  甲酸铵甲酸水缓冲液：c（HCOONH4）=0.005mol/L，φ（HCOOH）=0.1%。准确称取0.157g甲酸铵（4.4）溶于适量水中，溶解后转移至0.5L容量瓶中，加0.5ml甲酸（4.2），用水稀释定容至标线，混匀。

 

4.7  甲酸铵-甲酸缓冲液-甲醇混合溶液：1+1。用甲酸铵甲酸缓冲液（4.6）和甲醇（4.1）按1:1体积比混合。

 

4.8  甲醇溶液：1+19。用甲醇（4.1）和水按1:19体积比混合。

 

4.9  甲酸甲醇溶液：φ（HCOOH）=0.1%。准确移取1.0ml甲酸（4.2）于预先加入适量甲醇（4.1）的1L容量瓶中，用甲醇（4.1）稀释定容至标线，混匀。

 

4.10  氟喹诺酮类抗生素标准贮备液：ρ=100mg/L。可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.5%，用甲醇（4.1）溶解，在-20°C以下冷冻、避光保存。也可直接购买有证标准物质（溶液），参照产品说明书保存。

 

4.11  氟喹诺酮类抗生素标准使用液：ρ=2.0mg/L（参考浓度）。移取适量氟喹诺酮类抗生素标准贮备液（4.10），用甲醇（4.1）稀释，临用现配。

 

4.12  内标贮备液：ρ=100mg/L。推荐内标物为诺氟沙星-d5、恩诺沙星-d5和环丙沙星-d8，也可使用其他同位素物质。可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.0%，用甲醇（4.1）溶解，在-20°C以下冷冻、避光保存。也可直接购买有证标准物质（溶液），参照产品说明书保存。

 

4.13  内标使用液：ρ=0.5mg/L（参考浓度）。移取适量内标贮备液（4.12），用甲醇(4.1)稀释，临用现配。

 

4.14  固相萃取柱：填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB），规格为500mg/6ml/或同等柱效的萃取柱。

 

4.15  滤膜：0.45μm玻璃纤维滤膜或其他材质等效滤膜。

 

4.16  针式过滤器：滤膜为0.22μm聚醚砜或其他等效材质。

 

4.17  氮气：纯度≥99.99%

 

 

5  仪器和设备

 

5.1  液相色谱-三重四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI），具备梯度洗脱和多反应监测功能。

 

5.2  色谱柱：填料粒径为1.8μm，柱长50mm，内径2.1mm的C18液相色谱柱或其他性能相近的色谱柱。

 

5.3  固相萃取装置：自动或手动，带真空泵，流速可调节。

 

5.4  浓缩装置：氮吹浓缩仪或其他性能相当的设备。

 

5.5  旋涡混匀器：转动频次0rpm~3000rpm。

 

5.6  离心机：最高转速不低于5000r/min。

 

5.7  采样瓶：1000ml磨口或带聚四氟乙烯内衬垫瓶盖的棕色玻璃瓶。

 

5.8  微量注射器或移液器：10μl、50μl、100μl、500μl、1.0ml。

 

5.9  一般实验室常用仪器和设备。

 

 

6  样品

 

6.1  样品采集和保存

 

    按照HJ/T91和HJ494的相关规定进行样品的采集。样品采集时应充满样品瓶（5.7），不留空隙。样品采集后，立即用盐酸（4.3）调节pH至2.0，运输过程中应避光、密封、冷藏。样品采集完毕后应尽快分析，若不能及时分析，可于4°C以下避光保存7d。

 

 

6.2  试样的制备

 

6.2.1  样品的预处理

 

    用孔径为0.45μm的滤膜（4.15）对静置24h后的样品（6.1）过滤，若过滤不通畅，可用离心机（5.6）5000r/min离心10min，再按照进行试样的净化。

 

6.2.2  样品的净化

 

    将固相萃取柱（4.14）固定在固相萃取装置上，依次用6ml甲醇（4.1）和6ml水及6ml盐酸溶液（4.5）活化，保证小柱柱头浸润。量取1000ml预处理过的样品以8~12ml/min的流速通过小柱，样品体积可根据实际情况适当。上样完毕后，用6ml甲醇溶液（4.8）淋洗小柱。然后用固相萃取装置的真空泵干燥小柱25min，去除小柱中的残留水分。再用9ml甲酸甲醇溶液（4.9）洗脱小柱，收集洗脱液。洗脱液经浓缩装置浓缩至近干，加入20μL内标使用溶液（4.13），用甲酸铵甲酸水缓冲液-甲醇混合溶液（4.6）定容至1.0ml，涡旋混匀，经针式过滤器（4.16）过滤后置于进样瓶中，待测。

 

6.3空白试样的制备

 

    用实验用水代替样品，按照与试样的制备（6.2）相同的步骤进行空白试样的制备。

 

 

 

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