焙烤食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的测定高效液相色谱/质谱法

 

 

 

1 范围

 

本文件描述了食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的高效液相色谱/质谱测定方法的的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度和试验报告。

 

本文件适用于焙烤食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的定性定量测定。对含有γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物产品的含量检测可参照使用。

 

本文件检出限为4.2μg/kg，定量限为13.9μg/kg。

 

 

2 规范性引用文件

 

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

 

GB/T6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法

 

 

3 术语和定义

 

 

本文件没有需要界定的术语和定义。

 

 

 

 

4 原理

 

试样用正己烷脱脂后，用20%甲醇/水溶液提取，提取液经减压蒸干后复溶，试样溶液用高效液相色谱/质谱联用仪的多反应监测（MRM）模式测定，外标法定量。

 

 

5 试剂和材料

 

5.1试剂除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

 

5.1.1 甲醇（色谱纯）。

 

5.1.2 正己烷（分析纯）。

 

5.1.3 甲酸（色谱纯）。

 

5.1.4 甲醛（分析纯）。

 

5.1.5 乙二醛(glyoxal,GO，分析纯)。

 

5.1.6 γ-氨基丁酸（分析纯）。

 

5.2 试剂配制

 

5.2.1 甲醇/水溶液（20%）：移取50mL甲醇（5.1.1）于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。

 

5.2.2 甲酸/水溶液（0.1%）：移取0.25mL甲酸（5.1.3）于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。

 

5.3 标准品

 

γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物标准品（C11H16N2O4,CAS号：805228-41-5）：纯度大于98.0%。

 

5.4 标准溶液的配置

 

根据需要，用水配置γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的浓度为10mg/L的溶液，用水稀释得到一系列浓度的标准溶液（100μg/L、500μg/L、1000μg/L、2000μg/L、3000μg/L、4000μg/L）。

 

 

6 仪器设备

 

6.1 液相色谱仪/三重四极杆质谱联用仪，配有电喷雾离子源（ESI）。

 

6.2 粉碎机(细度30～100目）。

 

6.3 分析天平，感量为0.0001克。

 

6.4 分析天平，感量为0.00001克。

 

6.5 高速离心机（12000转/分，14000×g)。

 

6.6 涡旋器（300rpm～3000rpm）。

 

6.7 常规实验室玻璃器皿。

 

 

7 试验步骤

 

7.1 样品的制备

 

称取3g粉碎后的样品（过60目筛）于50mL离心管中，加入10mL正己烷没过样品，涡旋5min后于10000rpm下离心10min，重复3次以完全去除油脂，置于通风橱中将残余的正己烷挥干。向离心管中加入15mL20%甲醇/水溶液，涡旋5min后于10000rpm下离心10min，收集上清液，该过程重复2次。将上清液减压蒸干，加20%甲醇/水溶解，定容至5mL。用0.22μm尼龙滤膜过滤，用HPLC-MS/MS的多反应监测模式(MRM)测定样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛含量。

 

7.2 色谱测定

 

7.2.1 高效液相色谱参考条件

 

a）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（C18）Aq柱，填料粒径5.0μm，柱长250mm，内径4.6μm，或其他等效色谱柱；

 

b）流动相：A相为含0.1%甲酸/水溶液，B相为甲醇，梯度洗脱程度：0～2min，5%B～95%B；2～8min，95%B～95%B；8min～10min，95%B～5%B；10min～18min，5%B。

 

c）流量：0.4mL/min；

 

d）柱温：40°C。e）进样量：0.5μL。

 

7.2.2 质谱参考条件

 

a）电离方式：阳离子电喷雾电离（ESI+）；

 

b）离子扫描模式：多反应监测模式（MRM）；

 

c）毛细管电压：4000V

 

d）解簇电压：50V

 

e）干燥气温度：300°C

 

f）干燥气流量：10L/min

 

g）雾化气压力：50Psih）监测离子范围：m/z50~800。

 

i）定性、定量离子见表1：

 

 

表1γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的优化电压参数

 

 

加合物种类	离子对	碰撞电压（eV）
γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛	241/155a 241/69 241/87	-16 -22 -22
a为定量离子

 

 

 

7.2.3 标准曲线的绘制

 

取5.4中的γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物标准溶液（100μg/L、500μg/L、1000μg/L、2000μg/L、3000μg/L、4000μg/L），按照色谱参考条件（7.2.1）进行测定，以标准系列中加合物的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

 

7.2.4 样品的测定

 

取样品溶液和标准溶液各0.5μL注入液相色谱进行分析，以其标准溶液目标峰的保留时间进行定性，根据峰面积计算样品中待测物质的含量。加合物的总离子流图和质谱图见附录A。

 

7.2.5 空白实验

 

除不称取样品外，均按照上述测定条件和步骤进行。

 

 

8 试验数据处理

 

样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的含量，按照公式（1）计算：

 

 

式中：

 

х——样品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的含量，微克/千克（μg/kg）；

 

C——样品中加合物的浓度，微克/升（μg/L）；

 

V——被测样品的总体积，毫升（mL）；

 

D——样品稀释倍数；

 

M——称取样品的质量，克（g）。

 

计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

 

 

9 精密度

 

9.1 一般规定本文件的精密度按照GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。

 

9.2 重复性

 

在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

 

9.3 再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

 

 

10 试验报告

 

试验报告至少应给出以下几个方面的内容：

 

——试验对象；

 

——所使用的标准；

 

——所使用的方法；

 

——结果；

 

——观察到的异常现象；

 

——试验日期。

 

 

 

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