混合型饲料添加剂 酸度调节剂中甲酸钙、乳酸、柠檬酸、富马酸丙酸钙的测定-高效液相色谱法

 

 

1、范围

    本文件规定了混合型饲料添加剂酸度调节剂中甲酸钙、乳酸、柠檬酸、富酸、丙酸钙的高效液相色谱测定方法。

 

    本文件适用于混合型饲料添加剂酸度调节剂中甲酸钙、乳酸、柠檬酸、富马酸、丙酸钙的测定。

 

    本方法检出限甲酸钙、乳酸、柠檬酸、丙酸钙为250 mgkg，富马酸为2.5 mgg，定量限甲酸钙乳酸、柠檬酸、丙酸钙为1000 mg/kg，富马酸为10 mgkg.

 

2、规范性引用文件

 
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    GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

 

    GB/T 201955 动物饲料试样的制备

 

3、术语和定义

    本文件没有需要界定的术语和定义。

 

4、原理

    混合型饲料添加剂酸度调节剂经碱化、加热分溶解和调整pH后用配有紫外(UV)测器或二极管阵列(DAD)检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量计算出甲酸钙、乳酸、柠檬酸、富马酸、丙酸钙的含量。

 

 

 

5、试剂与材料

 

    除非有特殊说明，本测定方法中所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。

 

5.1  乙晴(色谱纯)

5.2  磷酸。

5.3  氢氧化钠。

 

5.4  硫酸。

5.5  0.05%磷酸溶液:移取磷酸0.50m至1000m 容量瓶中，加水定容。

5.6  10molNaOH 溶液:移取28.00mL,饱和 NaOH 溶液于 50.00mL,容量瓶中，定容至刻度，摇匀。

 

5.7  20%硫酸溶液(V/V):量取硫酸20m，使用玻璃棒引流缓缓加入装有80ml水的烧杯中，边倒边搅拌，冷却至室温。

5.8  甲酸钙标准品(CAS:544-17-2):纯度>99%。

5.9  乳酸钙标准品(CAS:814-80-2):纯度>61.18%(折算成乳酸含量)。

5.10  柠檬酸标准品(CAS:77-92-9):纯度>99.5%。

5.11  富马酸标准品(CAS:110-17-8):纯度>99%。

5.12  丙酸钙标准品(CAS:4075-81-4):纯度>99%。

 

5.13  甲酸钙标准储备液:称取甲酸钙标准品(5.8)0.1g(精确至0.00001g)于10m 容量瓶中，用水溶解，定容至刻度。此溶液浓度为10mg/mL，2℃~8 ℃条件下储藏，保存期3个月。

 

5.14  乳酸钙标准储备液:准确称取 0.1g(精确至 0.00001g)乳酸钙标品(5.9)于10mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度。此溶液此溶液浓度为10mgmL，2℃~8 ℃条件下储藏，保存期3个月。

 

5.15  柠檬酸标准储备液:称取柠檬酸标准品(5.10)0.1g(精确至0.00001g)于10mL 容量瓶中，用水溶解，定容至刻度。此溶液浓度为10mg/mL，2℃~8 ℃条件下储藏，保存期3个月。

 

5.16  富马酸标准储备液:称取富马酸标准品(5.11)0.1g(精确至0.00001g)于100mL容量瓶中，加入 30mL~40mL 水,超声 30min 进行溶解,取出冷却后,用水定容至刻度。此溶液浓度为 1mg/mL,2 ℃~8 ℃条件下储藏，保存期3个月。

 

5.17  丙酸钙标准储备液:称取丙酸钙标准品(5.12)01g(精确至0.00001g)于10mL容量瓶中，用水溶解，定容至刻度。此溶液浓度为10mg/mL，2℃~8℃条件下储藏，保存期3个月。

 

5.18  混合酸标准中间溶液:分别准确吸取5.00nL甲酸钙标准储备液(5.13)、5.00mL,乳酸钙标准储备液(5.14)、5.00mL柠檬酸标准储备液(5.15)、0.50m富马酸标准储备液(5.16)、5.00mL 丙酸钙标准储备液(5.17)于50mL容量瓶中，用水定容到刻度，摇与静置。此为混合酸中间溶液，临用现
配。

 

5.19  混合酸标准工作溶液:分别准确吸取0.10m、0,50mL、1.00mL、5.00m工、和 10.00mL 混合酸中间溶液(5.18)于 10m,容量瓶中，用水定容到刻度，摇匀静置。此为混合酸标准工作溶液，临用现配。

 

5.20  水性微孔滤膜:孔径0.45pm。

 

6  仪器与设备

6.1  分析天平:感量0.00001g，感量0.0001g。

6.2  高效液相色谱仪:配有紫外(UV)检测器或一极管阵列(DAD)检测器。

6.3  pH计。

6.4  恒温水浴锅。

 

7、试样制备与保存

   至少200 g，粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛，充分混与，装入按GB/T20195制备样品，:口瓶中，避光保存，备用。

 

8、测定步骤

 

8.1 样品溶液制备

8.1.1 甲酸钙、乳酸、柠檬酸、丙酸钙

    称取样品 1.0 g(精确到 0.0001g)于250m,的锥形瓶中,加入30~40mL的水,再加入2.00mL 10molNaOH 溶液(5.6)，在 95℃的恒温水浴锅中加热 30min。取出趁热滴入 10 滴 20%硫酸溶液(5.7)，摇匀。放置冷却剑常温后,用 20%硫酸溶液(5.7)及 10molL, NaOH 溶液(5.6)溶液调节 pH 至 2.10-2.40。将溶液转移至 100mL,容量瓶中，用水定容，摇匀静置。取部分溶液过 0.45um 滤膜，用于色谱分析。

 

8.1.2 富马酸

    取8.1.1中溶液的上层清液1.00ml F100mL 容量瓶中，用水定容，摇匀静置。溶液过0.45um滤膜后作为样液，用于色谱分析。

8.2 高效液相色谱参考条件

    a)色谱柱:C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5um;

    b)流动相:V(乙腈)+V(0.05%酸溶液)=1+99;

    c)流速:1mLmin:

 

    d)检测波长:210nm;

    e)柱温:25℃℃;

    f)进样体积:10uL。

8.3 标准系列溶液和试样溶液测定

分别吸取混合酸标准工作溶液和试样溶液，按8.2的色谱条件进行色谱分析测定。测定时，样品溶液与标准工作溶液等体积进样进行测定,并保证样品溶液中的响应值均应在标准工作曲线的线性范围内试样溶液中待测物超出线性范围时适当稀释后用于色谱分析。甲酸钙、乳酸、柠檬酸、富马酸、丙酸钙标准溶液的高效液相色谱图参见附录A。

 

 

 

9、结果计算与表述

试样中甲酸钙、乳酸、柠檬酸、富马酸和丙酸钙的含量 w，以质量分数“%”表示，按下式计算:

 

式中:

 

    c-由标准曲线得出的试样中甲酸钙、乳酸、柠檬酸、富马酸、丙酸钙的浓度，单位为毫克每毫升(mg/L):

    V-试样溶液总体积，单位为毫升(mL):

    n-稀释倍数;

    m-试样的质量，单位为克(g)。

    测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留至小数点后2位。

 

10、精密度

    在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对值不大该算术平均值的5%。

 

 

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