食品中非法添加药物氨基比林的快速检测拉曼光谱法

 

 

 

1、范围

 

    本文件规定了食品中氨基比林的拉曼光谱快速检测方法。

 

    本文件适用于声称具有解热镇痛、治疗风湿等功能的食品中氨基比林成分的快速检测。

 

 

2、规范性引用文件

 

    下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

 

    GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。

 

 

3、术语和定义

 

    本文件没有需要界定的术语和定义。

 

 

 

4、原理

 

    不同物质具有与其分子结构相对应的特征拉曼光谱。一般样品经稀释，复杂样品经液液萃取，加表面增强试剂对信号增强，进行拉曼光谱扫描。与标准谱图库中的氨基比林特征拉曼位移（570 cm-1±3cm-1,637 cm-1±3cm-1,1591cm-1±3cm-1）进行匹配识别，对样品中的氨基比林进行定性判定。

 

 

5、试剂和材料

 

5.1  试剂除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

 

5.1.1  乙酸乙酯，色谱纯。

 

5.1.2  甲醇，色谱纯。

 

5.1.3  色素净化管：2mL离心管配比：0.12g无水硫酸镁+0.04g活性炭。

 

5.1.4  碱化试剂：准确称取8 g氢氧化钠，用水定容至100 mL。

 

5.1.5  促凝剂：1 mol/L的硝酸。

 

5.1.6  表面增强试剂：纳米金溶胶或相当者。避光，4 °C~20 °C保存，有效期6个月。

 

    注：表面增强试剂的参考配制方法：纳米金溶胶：取100mL0.01%氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加热至沸，剧烈搅拌下准确加入1.0mL 1%柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液，金黄色的氯金酸水溶液在2min内变为红色，继续煮沸15min，冷却后用蒸馏水补加到100mL。

 

5.1.7  氨基比林标准品：C13H17N3O，CAS号：58-15-1，纯度≥98%。

 

5.1.8  氨基比林标准溶液：准确称取标准物质0.1000 g，甲醇（HPLC）准确定容至100 mL。保证配制样本浓度为1 mg/mL，于4 °C避光保存，有效期1个月。

 

5.2  材料

 

5.2.1  塑料具塞离心管：2 mL和10 mL。

 

5.2.2  移液吸头：200μL，1000 μL和5000 μL。

 

 

6、仪器设备

 

6.1  便携式拉曼光谱仪稳频激光光源：发射波长为785±1 nm，线宽<0.1 nm，能量≥250 mW；光谱分辨率≤10 cm-1；光谱响应范围300cm-1~2700 cm-1，或大于该响应范围。

 

6.2  移液器：100 μL、1000 μL和5000 μL。

 

6.3  涡旋振荡器。

 

6.4  离心机：转速≥10000r/min。

 

6.5  电子天平：感量为0.01 g和感量为0.0001 g。

 

 

7、测定步骤

 

7.1提取

 

7.1.1  胶囊类样品

 

    取待测样品内部粉末0.5 g，倒入10 mL离心管中，从步骤2开始进行处理；向离心管中加入3000 μL乙酸乙酯，涡旋振荡1分钟，静置1分钟，取1500 μL上清液于2 mL离心管中，10000转/分钟离心30秒；取1000 μL离心后清液于色素净化管中，振荡混匀，10000转/分钟离心30秒；取离心后液体600 μL于2 mL离心管，向其中加入400 μL碱化试剂，振荡10秒后，10000转/分钟离心10秒，取上层清液待测；

 

7.1.2  药丸类样品

 

    将待测样品用洁净容器破碎后取0.5 g，用洁净容器破碎后，倒入10 mL离心管中，从步骤2开始进行处理；向离心管中加入3000 μL乙酸乙酯（涡旋振荡1分钟，静置1分钟，取1500 μL上清液于2 mL离心管中，10000转/分钟离心30秒；取1000 μL离心后清液于色素净化管中，振荡混匀，10000转全国团体标准信息平台
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7.1.3  液体类样品

 

    用移液器（或洁净滴管）吸取1000μL待测样品，加入到10 mL离心管中，从步骤2开始进行处理；向离心管中加入2000 μL乙酸乙酯，涡旋振荡1分钟，静置1分钟，取1500 μL上清液于2 mL离心管中，10000转/分钟离心30秒；取1000 μL离心后清液于色素净化管中，振荡混匀，10000转/分钟离心30秒；取离心后液体600 μL于2 mL离心管，向其中加入400 μL碱化试剂，振荡10秒后，10000转/分钟离心10秒，取上层清液待测。

 

7.2  测定

 

7.2.1  拉曼光谱仪器分析参考条

 

    激光能量≥250 mW，数据采集时间≥4 s。

 

7.2.2  表面增强和测定

 

    向检测瓶中依次加入300 μL表面增强试剂（5.1.6），50 μL待测液，100 μL促凝剂（5.1.5），混匀后立即置于检测池中检测。

 

7.3  质控试验

 

    每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。

 

7.3.1  阴性对照

 

    称取空白试样，按照7.1和7.2步骤与样品同法操作。

 

7.3.2  阳性对照

 

    准确称取空白试样20 g置于15 mL具塞离心管中，加入100 μL氨基比林标准溶作液（5.1.8），使待测样本浓度为20 mg/kg，按照7.1和7.2步骤与样品同法操作。

 

 

8、结果计算和表述

 

8.1  定性

 

    仪器软件将测试结果与标准谱图库中的氨基比林进行匹配识别，根据谱图570 cm-1±3 cm-1,637 cm-1±3 cm-1,1591 cm-1±3 cm-1处特征拉曼光谱，对样品中的氨基比林进行结果判定，当样品的拉曼峰包含该目标物的2个以上特征峰判定为阳性。阴性代表该样品不含有氨基比林或者低于检出限，阳性则代表该样品含有氨基比林且大于等于检出限。氨基比林表面增强拉曼光谱图见附录A.1。

 

 

8.2 确证

 

    本方法为初筛方法，当检测结果为阳性时，应用其他技术手段进行确证。

 

 

9、方法性能指标

 

9.1  检出限

 

    本方法检出限为20mg/kg。

 

9.2  灵敏度

 

    灵敏度应≥95%。

 

9.3  特异性

 

    特异性应≥95%。

 

9.4  假阴性率

 

    假阴性率应≤5%。

 

9.5  假阳性率

 

    假阳性率应≤5%。性能指标计算方法见附录B中表B.1。

 

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